疏风解毒胶囊药效物质基础及作用机制研究

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⊙作者：张铁军，朱月信，刘岱琳，白钢，许浚，韩彦琪，刘素香

⊙编辑：小余

疏风解毒胶囊由虎杖、连翘、板蓝根、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草8味中药组成，具有疏风清热、解毒利咽的功效，用于急性上呼吸道感染属风热症，症见发热、恶风、咽痛、头痛、鼻塞、流浊涕、咳嗽等症，为卫生部《甲型H1N1流感诊疗方案》（年第2、3版，年版）、《流行性感冒诊断与治疗指南》（年版）、国家中医药管理局《外感发热（上呼吸道感染）诊疗方案》和《时行感冒（甲型H1N1流感）诊疗方案》《年时行感冒（乙型流感）中医药防治方案》《人感染H7N9禽流感诊疗方案》（年第1、2版，年版）、国家卫计委《医院感染预防与控制技术指南》（年版）推荐用药。疏风解毒胶囊是治疗急性上呼吸道感染的中药大品种。

目前，有关该制剂的化学成分研究报道多局限于单一药材的成分分析，尚未见其全方的成分分析报道。已有文献报道，疏风解毒胶囊对呼吸道合胞病毒（RSV）、柯萨奇病毒B3型（CVB3）和单纯疱疹病毒1型（HSV-1）具有抑制作用；对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、志贺氏痢疾杆菌、肺炎链球菌、乙型链球菌都有一定的抑制作用[1]；在体内对H1N1流感病毒感染有防治作用[2-3]；在体外对人手足口病病毒EV71H株、CoxB3株、CoxB5株均具有明显的抑制作用[4]。

虽然疏风解毒胶囊为治疗急性上呼吸道感染的重要中药品种，已有药效及临床研究证实其确有疗效，但迄今为止，其药效物质基础不清、作用机制尚不明确，因此，有必要对该药的药效物质基础进行系统的研究，并通过药效学相关研究和分析，阐释该药的药效物质基础和作用机制，为该药的临床应用和质量控制提供科学依据。

1化学物质组的辨识和表征

目前，疏风解毒胶囊未见化学成分研究报道，本课题组对疏风解毒胶囊的化学物质基础进行了研究，通过HPLC-Q-TOF-MS/MS法共识别了96个离子流色谱峰，分析确定了其中94个化合物，其中氨基酸7个、糖类1个、环烯醚萜类化合物7个、苯乙醇苷类化合物11个、二苯乙烯类化合物2个、黄酮类化合物25个、木脂素类化合物5个、蒽醌类化合物6个、三萜类化合物18个、香豆素类化合物1个、酚酸类化合物4个、生物碱类化合物5个、其他小分子化合物2个。对所有化合物分别进行了药材来源归属，结果分别来源于处方中的虎杖（12个）、连翘（18个）、板蓝根（14个）、柴胡（8个）、败酱草（14个）、马鞭草（11个）、芦根（5个）、甘草（21个），见表1。

2药效物质基础的筛选和确认

2.1抗炎药效物质基础的筛选

采用UPLC/Q-TOF-MS整合NF-κB双荧光素酶报告基因系统的筛选体系，快速准确地筛选鉴定疏风解毒胶囊中潜在的抗炎活性成分，明确其抗炎药效物质基础。通过活性筛选实验，确定了10个活性单体，按照结构类型分类，主要有苯乙醇苷类（连翘酯苷E、连翘酯苷A、异连翘酯苷A、毛蕊花糖苷）、环烯醚萜苷类（戟叶马鞭草苷、马鞭草苷）、木脂素类（连翘苷）、黄酮类（3-羟基光甘草酚、牡荆苷）和蒽醌类（大黄素）化合物。抗炎药效物质UPLC/Q-TOF、生物活性分析及结构信息见图1及表2。

2.2验证试验

以原代小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，建立了脂多糖（LPS）诱导的炎症模型，在体外细胞水平上评价马鞭草苷、连翘酯苷A、连翘苷、牡荆苷、大黄素5个单体化合物的抗炎效果。结果表明，5个化合物能显著抑制原代小鼠腹腔巨噬细胞中LPS诱导的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达水平，并且呈现一定的剂量依赖关系，验证了5个单体化合物的抗炎效果。

3解热作用及其机制研究

3.1解热作用研究

采用酵母致大鼠发热模型，研究疏风解毒胶囊的解热作用，结果显示，造模后5、6h，模型组与对照组比较，大鼠肛温有非常显著性地升高，说明造模成功。与模型组比较，疏风解毒胶囊高、低剂量组大鼠肛温有显著性降低，表明疏风解毒胶囊有显著的解热作用。

3.2作用机制研究

采用酵母致大鼠发热模型，研究疏风解毒胶囊给药后对体温调节相关因子IL-1α、IL-1β、TNF-α、γ干扰素（IFN-γ）、前列腺素E2（PGE2）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、Na＋,K＋-ATPase、IL-6、精氨酸升压素（AVP）的影响。结果显示，疏风解毒胶囊能显著降低炎症因子PGE2及细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1α、IL-1β水平，显著降低致热介质cAMP及cAMP/cGMP水平，显著降低Na＋,K＋-ATPase，减少产热，显著升高内源性解热介质AVP的量。表明疏风解毒胶囊能显著抑制炎症因子PGE2产生，从而显著抑制致热性细胞因子TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-6的生成，进而减少产热因子cAMP、Na＋,K＋-ATPase等的量，降低cAMP/cGMP，减少产热，并使内源性解热介质AVP量增加，从而发挥其解热作用。

4抗炎作用机制研究

4.1抗炎网络药理学研究

对筛选鉴定出的10个抗炎活性单体（连翘酯苷E、连翘酯苷A、异连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、连翘苷、3-羟基光甘草酚、牡荆苷、大黄素）利用PharmMapper和KEGG等生物信息学手段对其结构母核进行靶点及作用通路的预测分析，预测10种成分可能通过HRAS、PDPK1、MAP2K1等31个靶点作用于炎症反应的Focaladhesion、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、FcepsilonRI、过氧化物酶体增殖体激活受体（PPAR）、Toll样受体（Toll-likereceptor）、NK细胞介导的细胞毒、血管内皮生长因子（VEGF）、B细胞受体和T细胞受体信号等19条通路，其中MAPK、Toll样受体、PPAR、VEGF、Fcepsilon、花生四烯酸代谢（arachidonicacidmetabolism）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、表皮生长因子受体（ErbB）、Wnt信号通路和fcocaladhesion信号通路与炎症相关。补体系统（

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